Πώς να κάνετε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο διάλυμα (PBS)

Ο ρυθμισμένος με φωσφορικό αλατούχος ορός (PBS) είναι ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται συνήθως για χρώση ανοσοϊστοχημικής (IHC) και χρησιμοποιείται συχνά στη βιολογική έρευνα. Το PBS είναι ένα διάλυμα άλατος με βάση το νερό που περιέχει όξινο φωσφορικό νάτριο, χλωριούχο νάτριο και, σε ορισμένες περιπτώσεις, χλωριούχο κάλιο και δισόξινο φωσφορικό κάλιο.

Ανοσοϊστοχημική χρώση

Η ανοσοϊστοχημεία αναφέρεται στη διαδικασία ανίχνευσης αντιγόνων όπως πρωτεϊνών στα κύτταρα ενός τμήματος ιστού χρησιμοποιώντας την αρχή αντισωμάτων που δεσμεύονται ειδικά με αντιγόνα σε βιολογικούς ιστούς. Η χρώση ανοσοφθορισμού ήταν η πρώτη μέθοδος ανοσοϊστοχημικής χρώσης.

Τα αντιγόνα γίνονται ορατά όταν συζευγνύονται με αντισώματα χρησιμοποιώντας χρωστικές φθορισμού λόγω αντίδρασης δέσμευσης αντιγόνου-αντισώματος. Αυτή η διαδικασία εμφανίζεται όταν ενεργοποιείται από το συναρπαστικό φως ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος κάτω από ένα φθορίζον μικροσκόπιο.

Η οσμωτικότητα και οι συγκεντρώσεις ιόντων των διαλυμάτων ταιριάζουν με εκείνες του ανθρώπινου σώματος - είναι ισοτονικές.

Μια συνταγή για ρυθμιστικό διάλυμα PBS

Μπορείτε να προετοιμάσετε το PBS με διάφορους τρόπους. Υπάρχουν πολλοί τύποι. Ορισμένα από αυτά δεν περιέχουν κάλιο, ενώ άλλα περιέχουν ασβέστιο ή μαγνήσιο.

Αυτή η συνταγή είναι σχετικά εύκολη. Είναι για 10X διάλυμα αποθέματος PBS (0,1M). Ωστόσο, μπορείτε επίσης να κάνετε μια 1X stock λύση, ή να ξεκινήσετε με αυτή τη συνταγή 10X και να την αραιώσετε σε 1X. Η όλη διαδικασία διαρκεί περίπου 10 λεπτά και παρέχεται και η δυνατότητα προσθήκης Tween.

Τι θα χρειαστεί για να κάνετε Buffer PBS

• Μονοβασικό φωσφορικό νάτριο (άνυδρο)
• Διβασικό φωσφορικό νάτριο (άνυδρο)
• Χλωριούχο νάτριο
• Ζυγίστε και ζυγίστε βάρκες
• Μαγνητικός αναδευτήρας και ράβδος ανάδευσης
• Ένας ανιχνευτής pH που βαθμονομείται και κατάλληλα διαλύματα για ρύθμιση του pH
• Ογκομετρική φιάλη 1L
• Tween 20 (προαιρετικό)

Πώς να κάνετε το ρυθμιστικό διάλυμα PBS

1. Ζυγίζονται 10,9 g άνυδρο διβασικό φωσφορικό νάτριο (Na2HPO4), 3,2 g μονοϋδρικό φωσφορικό νάτριο (NaH2PO4) και 90 g χλωριούχο νάτριο (NaCl). Διαλύεται σε λίγο λιγότερο από 1L απεσταγμένο νερό.
2. Ρυθμίστε το ρΗ σε 7,4 και ορίστε το διάλυμα μέχρι τελικό όγκο 1L.
3. Αραιώστε 10X πριν από τη χρήση και ρυθμίστε ξανά το pH εάν είναι απαραίτητο.
4. Μπορείτε να φτιάξετε ένα διάλυμα PBS που περιέχει 0,5% Tween 20 προσθέτοντας 5mL Tween 20 στο 1L διάλυμα.

Συμβουλές για τη δημιουργία ρυθμιστικού διαλύματος PBS

Αποθηκεύστε το ρυθμιστικό διάλυμα σε θερμοκρασία δωματίου αφού έχετε κάνει τη λύση PBS.

Τα μη άνυδρα αντιδραστήρια μπορούν να αντικατασταθούν, αλλά θα πρέπει να υπολογίσετε εκ νέου την κατάλληλη μάζα του καθενός για να φιλοξενήσετε τα πρόσθετα μόρια νερού.

Χρήσεις Ρυθμιστικού διαλύματος PBS

Ο ρυθμισμένος με φωσφορικό αλατούχος ορός έχει πολλές χρήσεις επειδή είναι ισοτονικό και μη τοξικό στα περισσότερα κύτταρα. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αραίωση των ουσιών και συχνά χρησιμοποιείται για την έκπλυση των δοχείων των κυττάρων. Το PBS μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αραιωτικό σε διάφορες μεθόδους για την ξήρανση βιομορίων, επειδή τα μόρια νερού μέσα σε αυτό θα δομηθούν γύρω από την ουσία-πρωτεΐνη, για παράδειγμα. Θα "στεγνώσει" και ακινητοποιηθεί σε μια στερεή επιφάνεια.

Το ρΗ παραμένει σταθερό και συνεκτικό για την πρόληψη της καταστροφής των κυττάρων.

Η λεπτή μεμβράνη του νερού που δεσμεύεται με την ουσία αποτρέπει τη μετουσίωση ή άλλες αλλαγές διαμόρφωσης. Τα αποθέματα ανθρακικών αλάτων μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον ίδιο σκοπό αλλά με λιγότερη αποτελεσματικότητα.

Το PBS μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για να ληφθεί ένα φάσμα αναφοράς όταν μετράται η απορρόφηση πρωτεΐνης σε ελλιψομετρία.