Μάθετε πώς να κάνετε ένα buffer TAE σε λίγα βήματα

Το ρυθμιστικό διάλυμα ΤΑΕ είναι διάλυμα που αποτελείται από βάση Tris, οξικό οξύ και EDTA (Tris-acetate-EDTA). Είναι ιστορικά το πιο συνηθισμένο ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται για ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης στις αναλύσεις προϊόντων ϋΝΑ που προκύπτουν από ενίσχυση PCR, πρωτόκολλα καθαρισμού ϋΝΑ ή πειράματα κλωνοποίησης ϋΝΑ.

Αυτό το ρυθμιστικό έχει χαμηλή ιοντική ισχύ και χαμηλή ικανότητα ρύθμισης. Είναι καλύτερα κατάλληλο για ηλεκτροφόρηση μεγάλων (> 20 kb) τεμαχίων DNA και θα πρέπει να αντικαθίσταται συχνά ή να επανακυκλοφορεί για μεγαλύτερους χρόνους (> 4 ώρες). Με αυτό κατά νου, μπορεί να θέλετε να εξετάσετε διάφορες παρτίδες του buffer.

Δεδομένου ότι το buffer είναι εύκολο να γίνει και τα βήματα μπορούν να γίνουν γρήγορα, κάνοντας περισσότερες από μία παρτίδες τη φορά δεν θα πρέπει να είναι ιδιαίτερα χρονοβόρες ή δύσκολο να τραβηχτούν. Χρησιμοποιώντας τις παρακάτω οδηγίες, θα πρέπει να διαρκέσει μόλις 30 λεπτά για να δημιουργήσετε το buffer της TAE. Δείτε πώς:

Προετοιμάστε μια λύση αποθέματος EDTA

Ένα διάλυμα EDTA (αιθυλενοδιαμινο τετραοξικό οξύ) προετοιμάζεται μπροστά από το χρόνο. Το EDTA δεν θα φτάσει τελείως σε διάλυμα έως ότου το ρΗ ρυθμιστεί σε περίπου 8,0. Για ένα αποθεματικό διάλυμα 500 χιλιοστόλιτρων EDTA 0,5 Μ, ζυγίστε 93,05 γραμμάρια δινατρίου άλατος EDTA (FW = 372,2). Διαλύεται σε 400 χιλιοστόλιτρα απιονισμένου νερού και ρυθμίζεται το ρΗ με υδροξείδιο του νατρίου (NaOH). Συμπληρώστε το διάλυμα σε τελικό όγκο 500 ml.

Αποκτήστε μια λύση αποθεμάτων TAE

Δημιουργήστε ένα συμπυκνωμένο (50x) αποθεματικό διάλυμα ΤΑΕ ζυγίζοντας 242 γραμμάρια βάσης Tris (FW = 121.14) και διαλύοντας το σε περίπου 750 χιλιοστόλιτρα απιονισμένου νερού. Προσθέστε προσεκτικά 57,1 χιλιοστόλιτρα παγετώδους οξέος και 100 χιλιοστόλιτρα EDTA 0,5 Μ (pH 8,0). Στη συνέχεια ρυθμίστε το διάλυμα σε τελικό όγκο 1 λίτρου. Αυτό το αποθεματικό διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου. Το ρΗ αυτού του ρυθμιστικού διαλύματος δεν ρυθμίζεται και θα πρέπει να είναι περίπου 8,5.

Προετοιμάστε μια λύση εργασίας της TAE

Το διάλυμα εργασίας του ρυθμιστικού διαλύματος 1x TAE παρασκευάζεται με απλή αραίωση του αποθεματικού διαλύματος κατά 50 φορές σε απιονισμένο νερό. Οι τελικές συγκεντρώσεις διαλυμάτων είναι 40 mM. Tris-οξικό και 1 mM EDTA. Το ρυθμιστικό είναι τώρα έτοιμο για χρήση κατά τη λειτουργία ενός πηκτώματος αγαρόζης.

Τι χρειάζεστε για το buffer

Δεδομένου ότι η δημιουργία του buffer TAE απαιτεί μόνο ένα γρήγορο και απλό σύνολο οδηγιών, ο αριθμός των υλικών που απαιτούνται για αυτό δεν είναι υπερβολικά. Θα χρειαστείτε μόνο δινάτριο άλας EDTA, βάση Tris και παγόμορφο οξικό οξύ.

Η δημιουργία του buffer απαιτεί επίσης ένα μετρητή pH και πρότυπα βαθμονόμησης, ανάλογα με την περίπτωση. Θα χρειαστείτε επίσης μπουκάλια ή φιάλες των 600 χιλιοστόλιτρων και 1500 χιλιοστόλιτρων καθώς και κυλίνδρους με διαβαθμίσεις. Τέλος, θα χρειαστείτε απιονισμένο νερό, ανακατεύουμε ράβδους και ανακατεύουμε πλάκες.

Τυλίγοντας

Πού σκοπεύετε να δημιουργήσετε το buffer - σε ένα σχολείο, σε ένα εργοτάξιο ή σε άλλη τοποθεσία, όπως το σπίτι σας; Ελέγξτε το απόθεμα προτού αρχίσετε να βεβαιώνεστε ότι έχετε όλα τα παραπάνω υλικά για το buffer της TAE.

Εάν δεν προτιμάτε να πληρώνετε για υλικά, συνιστάται να κάνετε το buffer έξω από το σπίτι σας. Μπορείτε να παραγγείλετε εύκολα τα υλικά που χρειάζεστε online ή να επισκεφθείτε ένα ειδικό κατάστημα για αυτούς.