Πώς να παγώσει-Ξήρανση μιας βακτηριακής καλλιέργειας (λυοφιλοποίηση)

Η ξήρανση με κατάψυξη, η οποία ονομάζεται επίσης λυοφιλοποίηση ή κρυοτοξικότητα, είναι η διαδικασία απομάκρυνσης νερού από ένα προϊόν μετά την κατάψυξη του (και στη συνέχεια τοποθετείται υπό κενό) επιτρέποντας την αλλαγή του πάγου από στερεό σε ατμό, χωρίς να διέρχεται υγρή φάση. Ο πάγος (ή άλλοι κατεψυγμένοι διαλύτες) απομακρύνεται από ένα προϊόν μέσω της διαδικασίας εξάχνωσης και τα δεσμευμένα μόρια νερού απομακρύνονται μέσω της διαδικασίας εκρόφησης.

Τα βασικά της λυοφιλοποίησης

Ένας από τους καλύτερους τρόπους αποθήκευσης μιας βακτηριακής, μυκητιακής, ζυμομυκητικής ή άλλης καλλιέργειας μικροοργανισμών για μεγάλες χρονικές περιόδους είναι η χρήση της διαδικασίας της ξήρανσης με κατάψυξη. Αυτή η σύντομη εργαστηριακή διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί με οποιοδήποτε εμπορικά διαθέσιμο στεγνωτήριο που θα διατηρήσει τη συλλογή σας καλλιέργειας. Επειδή η λυοφιλοποίηση είναι η πιο πολύπλοκη και δαπανηρή μορφή ξήρανσης, η διαδικασία συνήθως περιορίζεται σε ευαίσθητα στη θερμότητα υλικά υψηλής αξίας. Οι ουσίες που δεν καταστρέφονται από την κατάψυξη μπορούν συνήθως να λυοφιλοποιηθούν, έτσι ώστε να μην είναι απαραίτητη η αποθήκευση σε ψυγεία.

Αυτή η διαδικασία μπορεί να διαρκέσει μόλις τρεις ώρες και για 24 ώρες, χωρίς να συμπεριλαμβάνεται ο χρόνος ανάπτυξης του πολιτισμού.

Η διαδικασία λυοφιλοποίησης βήμα-προς-βήμα

1. Κατ 'αρχάς, καλλιεργήστε μια ολονύκτια καλλιέργεια, ή γκαζόν, του μικροοργανισμού σε LB ή άλλη κατάλληλη θρεπτική άγαρ πλάκα.
2. Στη συνέχεια, προετοιμάστε τα αποστειρωμένα φιαλίδια με πώμα με αυτόκαυστο μπροστά από το χρόνο, με τα καπάκια (ελαστικά πώματα) να τοποθετούνται χαλαρά στην κορυφή. Τοποθετήστε τις ετικέτες χαρτιού που τυπώνονται με την ταυτότητα της καλλιέργειας μέσα στους σωλήνες πριν από τον αυτόκλειστο. Εναλλακτικά, χρησιμοποιήστε σωλήνες με καπάκια σχεδιασμένα για στειρότητα.
3. Προσθέστε 4 mL ρυθμιστικού λυοφιλοποίησης στην πλάκα. Εάν είναι απαραίτητο, τα κύτταρα μπορούν να εναιωρηθούν χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη γυάλινη ράβδο.

1. Μεταφέρετε γρήγορα το εναιώρημα καλλιέργειας στα αποστειρωμένα φιαλίδια. Προσθέστε περίπου 1,5 mL ανά φιαλίδιο. Σφραγίστε με το καπάκι από καουτσούκ.
2. Καταψύξτε το εναιώρημα καλλιέργειας μέσα στα φιαλίδια τοποθετώντας τα φιαλίδια σε καταψύκτη -20 βαθμούς Κελσίου.
3. Αφού οι καλλιέργειες καταψυχθούν, προετοιμάστε τον ξηραντή με κατάψυξη ενεργοποιώντας τον και αφήνοντας το χρόνο για να σταθεροποιηθεί η κατάλληλη θερμοκρασία και συνθήκες κενού. Κάνετε αυτό σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή για το συγκεκριμένο εμπορικό σήμα του στεγνωτηρίου που χρησιμοποιείτε.
4. Προσεκτικά και ασηπτικά, τοποθετήστε τα καπάκια του φιαλιδίου χαλαρά στο επάνω μέρος των φιαλιδίων, έτσι ώστε να μπορεί να διαφύγει η υγρασία κατά τη διάρκεια της διαδικασίας ξήρανσης με κατάψυξη και τοποθετήστε τα φιαλίδια σε θάλαμο καταψύξεως. Εφαρμόστε το κενό στο θάλαμο σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
5. Αφήστε τον χρόνο καλλιέργειας να λυοφιληθεί πλήρως (στεγνώσει). Αυτό μπορεί να διαρκέσει από λίγες ώρες μέχρι τη νύχτα ανάλογα με τον όγκο κάθε δείγματος και πόσες δείγματα έχετε.
6. Αφαιρέστε τα δείγματα από το θάλαμο κατάψυξης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και σφραγίστε αμέσως τα φιαλίδια με τα καπάκια από καουτσούκ και μετά με τις επικαλύψεις.
7. Αποθηκεύστε τη συλλογή λυοφιλοποιημένης καλλιέργειας σε θερμοκρασία δωματίου.

Προϊόντα που θα χρειαστείτε

• Ψυγείο-στεγνωτήριο
• Θρεπτικά συστατικά ή άλλες κατάλληλες πλάκες άγαρ (και εκκολαπτήριο για καλλιέργεια)
• Γυάλινη ράβδος
• Ρυθμιστικό διάλυμα λυοφιλοποίησης
• Φιαλίδια με επικάλυψη με επικάλυψη από καουτσούκ (και πώμα για την εφαρμογή των καπακιών)
• Καταψύκτης

_{Αναφορά:SP Scientific. Βασικές αρχές της ξήρανσης με ψύξη. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/}